Россия, Тобольск
СДЕЛАЙТЕ СВОИ УРОКИ ЕЩЁ ЭФФЕКТИВНЕЕ, А ЖИЗНЬ СВОБОДНЕЕ
Благодаря готовым учебным материалам для работы в классе и дистанционно
Скидки до 50 % на комплекты
только до 22.05.2025
Готовые ключевые этапы урока всегда будут у вас под рукой
Организационный момент
Проверка знаний
Объяснение материала
Закрепление изученного
Итоги урока
Была в сети 21.09.2023 15:39
Бородина Светлана Викторовна
преподаватель микробиологии
47 лет
10 806
3 722 
Местоположение
Специализация
Практическая работа №10 ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОКРАШЕННОМ СОСТОЯНИИ. ОКРАСКА ПО ГРАМУ.
Категория:
Биология
20.10.2021 20:49
Просмотр содержимого документа
«Практическая работа №10 ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОКРАШЕННОМ СОСТОЯНИИ. ОКРАСКА ПО ГРАМУ.»
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №10
ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОКРАШЕННОМ СОСТОЯНИИ
Цель занятия. Проведение окрашивания микроорганизмов сложным способом.
Студент должен знать
1.Простые и сложные методы окраски бактерий.
Студент должен уметь
1. Приготовить мазок-препарат, окрашенный сложным способом по Граму.
2. Провести микроскопию в светлом поле.
3. Провести дезинфекцию и утилизацию.
Материалы и оборудование. Микроскоп с конденсорами светлого поля. Предметные стекла, спиртовка, спички, красители (генциановый фиолетовый, водный раствор фуксина (разведение 1/10), люголь, спирт этиловый 96 %, штатив, бактериальная петля, пинцет, промывалка с водой или колба с водой и пипеткой, фильтровальная бумага, зубочистки.
Сложные методы окраски предусматривают последовательное использование нескольких красителей различного химического состава, что позволяет выявить определенные структуры бактериальной клетки.
Все бактерии по отношению к окраске по Граму делятся на грамположительные – темно-фиолетового цвета и грамотрицательные – красного (рис.1).
Рисунок 1 – Окраска по Граму. Фиолетовые стафилококки и красные вибрионы
Способность окрашиваться в тот или другой цвет зависит от их химического состава. У грамположительных бактерий в клеточной стенке отсутствуют ароматические и серосодержащие аминокислоты, отмечается низкое содержание липидов, а у грамотрицательных, напротив, эти вещества содержатся в большом количестве. В результате образуется прочный химический комплекс с белком, генциан фиолетовым и йодом, который не разрушается при кратковременном действии спирта. У грамотрицательного такого комплекса не образуется. Они легко обесцвечиваются под действием спирта.
Успех окраски зависит от ряда причин и прежде всего от правильности обработки спиртом. При длительном его воздействии краска может быть вымыта и из грамположительных бактерий. В таком случае в ходе дополнительной окраски фуксином они примут красный цвет. Слишком кратковременное действие спирта не позволит выявить грамотрицательные бактерии.
Задание 1
Заполните таблицу 1
Таблица 1 – Методика окраски мазков по Граму
| Этап | Время | Условия | Рисунок |
| 1. |
|
|
|
| 2. |
|
|
|
Задание 2
1.Подготовить рабочее место к работе.
2.Приготовить мазок препарата зубного налета:
-
небольшое количество зубного налета снять острым концом спички или зубочистки (материал берут из межзубных промежутков или у шейки зуба);
-
растереть на обезжиренном предметном стекле круг диаметром около 1 см (растирают посуху). Затем пипеткой или бактериальной петлей внести каплю воды постепенно готовя однородную взвесь и равномерно распределяя ее по поверхности стекла;
-
мазок высушить на воздухе и зафиксировать - предметное стекло (мазком вверх) держа пинцетом троекратно проводят через пламя горелки (стекло не должно быть холодным или сильно горячим).
Окраска по Граму
Окраску необходимо проводить в следующей последовательности:
-
окрасить мазок первым красителем генциановым фиолетовым, аккуратно используя пинцет, положить на мазок фильтровальную бумагу смоченную красителем (или положить сухую окрашенную фильтровальную бумагу смочив ее дистиллированной водой методом конверта). Время окрашивания 2 минуты;
-
бумагу удалить, избыток краски слить в лоток, не промывая для закрепления красителя на препарат нанести пипеткой несколько капель раствора Люголя на 1 минуту (до почернения);
-
раствор Люголя слить, не промывая водой, на препарат нанести несколько капель 96% спирта, на 30 секунд, осторожно покачивая стекло, обесцвечивание проводить до отхождения фиолетовых капель – струи краски;
-
тщательно смыть спирт водой;
-
мазок окрасить водным фуксином (2 минуты);
-
промыть водой и высушить кусочками фильтровальной бумаги (поверхность мазка осторожно промокнуть, остальную часть стекла можно протереть)
3.Провести микроскопию приготовленного микропрепарата с конденсором светлого поля (конденсор поднят). Описать и зарисовать микропрепараты (формы бактерий, взаимное расположение по отношению друг к другу при делении).
4.Провести дезинфекцию рабочего места и утилизацию микропрепарата. Провести дезинфекцию рук.
Приложение 1
Реактивы для окраски по Граму
1.Карболовый генцианвиолет
генцианвиолета 1 г
кислоты карболовой 2 г
спирта 96 % 10 мл
воды дистиллированной 100 мл
Растереть в ступке генцианвиолет с карболовой кислотой, добавить в начале спирт, а потом воду. Раствор выдержать сутки, профильтровать и использовать для окраски.
2.Раствор Люголя
калия йодистого 2 г
йода кристаллического 1 г
воды дистиллированной 300 мл.
В небольшом объеме дистиллированной воды растворить йодистый калий, а затем кристаллический йод, после этого довести объем до 300 мл.
3. Спирт 96 %.
4. Водный фуксин Пфейффера.
Фуксин готовят в виде концентрированного раствора Циля. Раствор обладает большой стойкостью при хранении. Его применяют при сложных методах окраски (окраска спор, кислотоустойчивых бактерий). Для простого окрашивания используют фуксин Пфейффера (фуксин Циля, разведенный в 10 раз дистиллированной воды). Он нестоек, и готовят его для работы на один день.
Карболовый фуксин Циля готовят следующим образом: фуксина основного 1 г, спирта 96 % 10 мл, кислоты карболовой кристаллической 5 г, воды дистиллированной 100 мл, растереть в ступке фуксин с карболовой кислотой, спирт добавлять постепенно, а затем небольшими порциями влить дистиллированную воду.
Вебинар для учителей
Свидетельство об участии БЕСПЛАТНО!
Полезное для учителя
Реализация образовательных программ осуществляется с применением исключительно электронного обучения и ДОТ
Закрыть через 4 секунд
