Практическая работа №7 Способы посева бактерий

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №7

СПОСОБЫ ПОСЕВА БАКТЕРИЙ

Знание физиологии и методов идентификации чистых культур бактерий является основой микробиологической диагностики инфекционных болезней. Питательные среды необходимы для выделения и идентификации микробов.

Цель: ознакомление с способами посева бактерий на плотные питательные среды

Материалы и оборудование: плотная питательная среда (МПА), физиологический раствор, бактериологические петли, шпатель, спиртовка, пробирка, пипетка, термостат с температурой 37 °С. Видео фильм «Питательные среды».

Слушатель должен знать

1. Способы посева бактерий (сплошной, истончающий штрих)

Слушатель должен уметь

1. Овладеть техникой посевов бактериологической петлей и шпателем Дригальского.

Задание 1

Зарисовать схемы посева микроорганизмов (сплошной посев методом Дригальского, посев истончающим штрихом по Голду).

Задание 2

Посмотреть видео «Способы посева». Сделав смыв с телефона произвести посев исследуемого материала на плотную питательную среду (в первую чашку произвести посев шпателем, во вторую бактериологической петлей).

Теоретическая часть

Рабочее место, где непосредственно проводится работа с культурами микроорганизмов, требует особенно тщательной обработки. Рабочий стол следует дезинфицировать не только до начала работы, но и после ее окончания. Для протирания поверхности стола можно использовать растворы лизола и хлорамина, а также 70%-ные (по объему) растворы изопропилового или этилового спиртов. В лаборатории не разрешается курить, хранить и употреблять еду, напитки, жевательную резинку. Работать следует в халатах.

Правила работы с культурами микроорганизмов. В лаборатории микроорганизмы выращивают в питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, матрацы и чашки Петри. Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инокуляцией. Перед посевом следует тщательно надписать на пробирке (колбе или чашке Петри) название микроорганизма и дату посева. Надпись делают маркером на стекле или на наклеенной этикетке. Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей, если микроорганизмы выращены на плотной среде. В том случае, когда пересевают культуры микроорганизмов, выросшие в жидкой питательной среде, пользуются стерильной пипеткой. Использованную пипетку следует немедленно перенести в дезинфицирующий раствор, например, 3 - 5%-ный водный раствор фенола или 2%-ный раствор хлорамина, не касаясь ею окружающих предметов.

Для получения смывов пользуются стерильными ватными тампонами, которые перед употреблением смачивают в стерильном физиологическом растворе. При исследовании мелких предметов (телефон) смыв делают со всей поверхности (тщательно протереть поверхность телефона). Затем тампон помещают в пробирку со стерильным физраствором, выдерживают там 5 минут, при этом пробирку постоянно нужно потряхивать.

Обязательным этапом бактериологического исследования является выделение чистой культуры микробов. С этой целью исследуемый материал высевают на плотную питательную среду и инкубируют в термостате в течение 18-24 часов при температуре 37^ОС.

Для получения изолированных колоний предложен разные методы разобщения клеток. Наибольшее распространение для выделения чистой культуры аэробных и факультативно-анаэробных бактерий получили метод посева штрихом и метод Дригальского.

1. Метод Дригальского – последовательный перенос исследуемого материала с помощью шпателя из одной чашки в последующие 2-3 чашки с агаром (рисунок 1).

Рисунок 1 – Получение изолированных колоний по методу Дригальского

1. Посев штрихами с помощью бактериологической петли (рисунок 2).

а б

Рисунок 2 – Схема посева штрихами (а, цифрами указана последовательность нанесения штрихов) и результат посева (б).

Техника посева зависит от характера исследуемого материала и консистенции питательной среды. Жидкий материал для посева берут бактериологической петлей или стерильной пипеткой. Все манипуляции проводят вблизи пламени горелки с соблюдением правил асептики. Бактериологическую петлю перед взятием материала и по окончании посева прокаливают в пламени горелки. Пипетки после посева погружают в дезраствор.

При посеве штрихом стерильной петлей берут каплю исследуемого материала и наносят его параллельными штрихами на поверхность агара в чашке Петри. В начале посева на петле имеется большое количество микробов, поэтому рост будет сплошным. С каждым штрихом на петле остается все меньше микробов, поэтому отмечается рост изолированных колоний. Посев штрихом имеет множество вариантов (рисунок 3).

Рисунок 3 – Варианты посева штрихами. Цифрами обозначена последовательность нанесения штрихов.

Шпателем по методу Дригальского исследуемый материал распределяется по поверхности среды в нескольких чашках Петри. При этом вначале материал распределяют по поверхности агара в первой чашке Петри, затем этим же шпателем материал переносят на последующие чашки. На первой чашке отмечается сплошной рост культуры, а на последующих выявляются изолированные колонии (рисунок 1).