Сепсис: сравнительный анализ методов диагностики

Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН, 2019, №2

© Коллектив авторов, 2019

УДК: 616.94/-053.31-07

А.А. Мишучков¹, М.Р. Акопян²

СЕПСИС: СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДОВ

ДИАГНОСТИКИ

«Центр детского творчества» Промышленного района г. Оренбурга, Россия

Оренбургский государственный медицинский университет Минздрава России, Оренбург, Россия

В статье проводится обзор и сравнительный анализ «классического» (бактериологического) метода и современных методов ранней диагностики сепсиса: на основе высокочувствительных биомаркеров (специфических белков), NAT-технологии, микро-РНК, иммунохроматографический тест, мультиплексной ПЦР, метод FISH. Точную диагностику, выявление патогенеза и лечение сепсиса могут дать в совокупности ряд методов (микробиологических и молекулярно-биологических). Эффективное выявление сепсиса возможно с помощью интегративного клинического и патофизиологического подходов.

Ключевые слова: сепсис, методы диагностики сепсиса, биомаркеры сепсиса, NAT-технологии, метод FISH

A. A. Mishuchkov¹, M.R. Hakobyan²

SEPSIS: COMPARATIVE ANALYSIS OF DIAGNOSTIC METHODS

Orenburg State University Orenburg, Russia

Orenburg State Medical University of the Ministry of Health of Russia, Orenburg, Russia

The article reviews and compares the “classical” (bacteriological) method and modern methods for the diagnosis of sepsis: methods based on highly sensitive biomarkers (procalcitonin, presepsin, interleukin-6, C-reactive block), NAT technologies, micro-RNA, suPAR protein , immunochromatographic test, multiplex PCR, molecular genetic method FISH. Effective detection of sepsis is possible using integrative clinical and pathophysiological approaches.

Key words: sepsis, diagnosis of sepsis, sepsis biomarker, FISH method

Введение

Актуальность изучения сепсиса обуславливается – высокой частотой заболевания и летальностью, значительным экономическим ущербом, наносимым заболеванием. В силу этого проблема диагностика и лечение сепсиса продолжает сохранять теоретическую и практическую значимость.

Частота возникновения сепсиса по всему миру оценивается ежегодно в 31,5 миллионов случаев, 19,4 из которых – тяжелый сепсис, 6 млн. летальных случаев, из которых 2 млн. - детские [18]. «В США регистрируется в год около 750 тыс. случаев бактериального или грибкового сепсиса, из которых 215 тыс. заканчиваются летально. В Великобритании из 150 тыс. случаев сепсиса летальными становятся порядка 37 тыс. случаев. В Германии сепсис является третьей по частоте причиной смерти» [12, с 295]. Задержка в диагностике сепсиса на один час приводит к увеличению вероятности смерти на 6-10%. Поэтому ранняя диагностика сепсиса с помощью сенсорных технологий позволяет значительно уменьшить риск летальности и повысить эффективность лечения.

Термин сепсис (с древнегреческого «σῆψις» - «разлагаться гнилью», латинского«sepsis»– «гниение»), под которым Аристотель понимал болезнь, связанную с нарушением соотношения жидкостей организма (кровь, слизь, желчь жёлтая, желчь чёрная). Гиппократ отделяет «пышащую лихорадку» от бешенства и летаргии. Гален под «гнилокровием» понимал любые изменения в организме, вызывающие лихорадку. Авиценна дифференцирует различные виды лихорадки, характерные для этого заболевания [8]. Н.И. Пирогов считал, что сепсис имеет заразное начало и диагностировал методом визуального осмотра с выделением наличия гноя в моче и кале. Он выделил две основные формы сепсиса: пиемию и септикемию [6,7,11].

В настоящее время под сепсисом понимается патологический процесс, как системная воспалительная реакция организма, вызванная тяжелым инфекционно-аллергическим процессом и чрезмерным иммунным ответом организма, в связи с попаданием в кровоток различных возбудителей и микроорганизмов, в том числе их токсинов, который носит жизнеугрожающий характер, мультиорганную дисфункцию и имеет высокую степень полиорганной недостаточности, возникновению септического шока и летальности. По определению И.А. Ерюхина (1997) сепсис – «это патологическая ситуация, развивающаяся при проникновении убиквитарной или нозокомиальной инфекции в кровоток, когда выявляется неспособность организма больного контролировать инфекционный процесс» [3]. Одним из последних определений сепсиса является следующий (Sepsis-3, 2016): Сепсис - это синдром с неопределённой патобиологией, с совокупностью патогенных внешних и внутренних факторов (физиологических, патологических и биохимических нарушений), приводящих к опасной для жизни дисфункции органов, вызванной нерегулируемой реакцией организма на инфекцию, повреждающей ткани и органы, в клиническом плане, который не имеет утвержденного универсального критерия стандартного диагностического теста [3].

Существуют различные концепции этиологии и патогенеза сепсиса: бактериологическая (И. В. Давыдовский, 1928), токсическая (В.С. Савельев, 1976), аллергическая (I. C. Royx, 1983), нейротрофическая (Сперанский Г. Н. , 1937), цитокиновая (W. Ertel, 1991)[20]. Согласно цитокиновой теории эндотоксины вызывают поступление в кровь большого количества цитокинов, которые регулируют иммунитет в организме, что приводит к синдромусистемной воспалительной реакции (ССВР) и иммунодепрессии. ССВР характеризуется двумя и более из названных признаков: количество лейкоцитов более 12 000 кл/мм3или менее 4 000 кл/мм3, или более 10% незрелых форм; температура тела выше 38 °С или ниже 36 °С; пульс более 90 уд/мин.; частота дыхания более 20/мин.: парциальное давление СО2 менее 32 мм рт. ст . [12].

Классическим методом диагностики сепсиса является бактериологический метод, одним из недостатков которого является то, что он не быстрый. Взятый образец крови на посев, дает первые результаты только через 1-3 суток, полный анализ через 5–7 дней [4, 5]. Данный метод подтверждает инфекционную этиологию и идентифицирует возбудителя и лишь корректирует проводимую эмпирическую антибиотикотерапию сепсиса. Культуральный метод использует сложное оборудование, типа BacT/ALERT (BioMerieux) и Bactec 9240 (Becton Dickinson), которые основаны на результатах регистрации количества СО2, выделяемого бактериями в процессе жизнедеятельности. Для культивирования ряда микроорганизмов, таких как микоплазмы, нокардии, риккетсии, хламидии используются серологические и молекулярно-биологические методы.

Таблица 1. Характеристика биомаркеров, используемых в ранней диагностики сепсиса.

Современная медицинская наука заинтересована в разработке альтернативных высокочувствительных, быстрых методов диагностики сепсиса и оценки его тяжести. В современной ранней диагностике сепсиса используют специфические белки — биомаркеры, которых известно более 200, из которых клиническое применение нашли только некоторые. Оптимальным считается такой метод диагностики сепсиса, который был бы коммерчески недорогим, простым, функциональным, с высокой степенью ранней диагностики, высокоспецифичным и чувствительным, имеющим корреляцию в связи с генерализацией инфекции и проводимыми лечебными мероприятиями. На настоящий момент, идеального маркера для диагностики сепсиса не найдено. Наиболее известный биомаркер — прокальцитонин, введенный как иммунолюминометрический метод диагностики сепсиса в Германии в 1996 г. [21]. Достоинство метода в том, что он позволяет проводить более точно дифференциальную диагностику бактериального воспаления и отражает динамику инфекции. Если в обычном состоянии у людей 0,5 нг/мл концентрации прокальцитонина, то при сепсисе может достигать 5420 нг/мл [21]. В случае возникновения сепсиса прокальцитонин вырабатывается в ответ на эндотоксины (грамотрицательный сепсис) или цитокины. Клинически распространенным в России является оценка уровня прокальцитонина в крови пациентов при использовании теста B.R.A.H.M.S. PCT на анализаторах Vidas и miniVidas, результаты известны через 20 минут. Далее выясняют этиологию сепсиса (прямая идентификация возбудителя) используя анализаторы Bact/ALERT и Vitek (результат через 30 минут). Берут кровь на гемокультуру (результат через 1-5 суток). Недостаток метода заключается в том, что метод не до конца позволяет оценить тяжесть состояния пациента, эффективность лечения и исход болезни. Поэтому для постановки точного диагноза и оценки тяжести состояния больных сепсисом необходимо проводить современные молекулярно-генетические, микробиологические и молекулярно-биологические исследования, с использованием других маркеров, в частности пресепсина [1,2,19]. Чувствительность к бактериальной инфекции у прокальцитонина составила 89%, у пресепсина - 92%, у интерлейкина-6 – 89%. Частота ложноположительтных результатову прокальцитонина составила – 25%, у пресепсина – 12,5%. Чувствительность пресепсина составляет 95%. При грамположительном сепсисе и 78% при грамотрицательном сепсисе [12].

Важным в диагностике сепсиса является использование технологии нуклеиновых кислот (NAT-технологий) для индикации вирусов и микробов, таких как микоплазмы, уреаплазмы, хламидии и др. Метод позволяет проводить мониторинг антибиотикорезистентности микроорганизмов и имеет два подхода: использование ПЦР для видовой идентификации микроорганизмов, выявленных микробиологически; выявление нуклеиновых кислот бактерий и грибов непосредственно из биоматериала [12]. Из неамплификационных методов идентификации микробов выделяется метод время-пролетной масс-спектрометрии (MALDI-TOFMS), который идентифицирует бактерии и грибы по их белковому профилю. Но данный метод доступен только для высокотехнологичных лабораторий.

Еще один метод диагностики сепсиса – обнаружение такого маркера сепсиса как С-реактивного белка, вырабатываемого в печени при повышении интерлейкина-6 (IL-6). Чувствительность С-РБ для диагностики сепсиса составляет от 44 до 100%, специфичность – от 58 до 98%. Данный метод не подходит для прогноза развития инфекции или сепсиса, но полезен для дифференцирования септических и асептических заболеваний. Биомаркер интерлейкин-6 является провоспалительным цитокином, который вырабатывается в ответ на инфекцию. Его диагностическая чувствительность составляет 76–100% и специфичность 70–96%. Ученые Стратклайдского университета в Шотландии [27] разработали недорогой и эффективный метод сенсорной диагностики с помощью игольчатого микроэлектрода для электрохимического обнаружения биомаркера сепсиса интерлейкин-6. Время анализа составляет около 30 минут, что говорит о ранней диагностике сепсиса.

Проанализируем разработки зарубежных и отечественных ученых в новейших методах диагностики сепсиса и выделим их преимущество.

Таблица №2 Характеристика новых методов ранней диагностики сепсиса

Экспресс-метод диагностики сепсиса создали исследователи из Лондонского королевского колледжа (King's College London) во главе с профессором Грэм Лордом (Graham Lord), которые выделили из крови больных сепсисом биомаркеры этого заболевания - микро-РНК в повышенных количествах (не кодирующих РНК – miR-150 и miR-4772-5p-iso) [19]. Метод позволяет определить уровень экспрессии данных микро-РНК в группе больных тяжелым сепсисом до 86%, а для получения результата требуется не более 2-х часов.

Исследователь Анна Густафссон (Anna Gustafsson) из Университета Мальме (Malmö University) для диагностики сепсиса использовала белок suPAR. В ходе научной работы было обнаружено, что концентрация этого белка в слюне в 10 раз выше, чем в крови. Брать образцы слюны гораздо проще, чем образцы крови. Также биомаркер белок suPAR можно использовать для диагностики и других серьезных заболеваний, таких, как рак и сахарный диабет [18].

Группа российских ученых во главе с Александром Осиповым разработала диагностический метод в виде тест-системы для полуколичественного иммунохроматографического анализа моноклональных антител [9]. Данный способ позволяет определить присутствие маркера и его концентрацию в образце.

С помощью метода мультиплексной ПЦР в наборе Hyplex BloodScreen (BAG, Германия) происходит идентификация нескольких бактериальных видов, включая метициллиночувствительные и метициллинорезистентные штаммы стафилококков, стрептококков и энтерококков, а также грамотрицательных бактерий и маркеры резистентности (гены van инесколько генов β-лактамаз). Метод занимает 3-4 часа при чувствительности и специфичности до 100% [24]. Набор SepsiTest (Molzym, Германия) позволяет провести полную видовую дифференцировку бактерий и грибов с помощью секвенирования генома, в частности выявить ген 16SрРНК бактерий и ген 18S рРНК грибов [25]. Недостаток метода, результаты возможны через 8–12 часов и невысокий уровень результатов. Набор LightCyclerSeptiFastTest (RocheMolecularSystems, США) на основе метода мультиплексной ПЦР позволяет идентифицировать около 25видов бактерий и грибов – возбудителей нозокомиальных септицемий с высокой степенью точности [26].

Один из современных методов — молекулярно-генетический метод FISH (флуоресцентная in situ гибридизация), который позволяет без выделения гемокультуры работать с образцами крови. Микробиологический тест PNA-FISH, разработанный в США является одним из перспективных направлений в диагностике сепсиса [23].В основе метода лежит механизм гибридизации in situ флуоресцентно меченных пептидно-нуклеотидных проб к ограниченному набору бактерий. Чувствительность и специфичность метода приближается к 100% и выполняется за 3 часа.

С помощью метода FISH оренбургские ученые Черкасов С.В., Плотников А.О., Щуплова Е. А. разработали способ подготовки эритроцитов для экспресс-диагностики сепсиса. Данный метод позволяет обнаружить микробы в эритроцитах и по количеству бактерий позволяет установить тяжесть течения заболевания. В качестве фиксатора эритроцитов при изучении взаимодействия эритроцитов с микроорганизмами методом FISH используется раствор глутарового альдегида [15,16]. Данный экспресс-метод имеет точность диагностики 80% и занимает всего от 2 до 8 часов. Метод оренбургских ученых является высокоточным, простым, технологичным, высокочувствительным и специфичным методом диагностики сепсиса.

Заключение

Таким образом, проанализировав новейшие методы диагностики сепсиса необходимо констатировать, что универсального и идеального метода в настоящее время не существует. Каждый метод имеет свои плюсы и минусы. Точная диагностика, патогенез и лечения сепсиса могут дать в совокупности ряд методов (микробиологических и молекулярно-биологических). Эффективное выявление, построение, управление и стратификация сепсиса возможна в единстве интегративного клинического и патофизиологического подхода. NAT-технологии диагностики сепсиса позволяют, например, определять и идентифицировать в крови, не растущие на обычных средах бактерии и грибы. Недостаток молекулярно-биологических методов заключается в их высокой стоимости. Но, при развитии медицинских технологий, скоро NAT-тестирование станет нормой в ранней диагностике сепсиса.

В настоящее время ранняя диагностика сепсиса имеет трудность в следствии гетерогенности природы септического заболевания и недостаточной специфичности его клинических проявлений. Востребованность изучения методов ранней диагностики сепсиса позволит снизить летальность от сепсиса в условиях генерализации инфекции и повысить уровень клинического лечения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Афанасьев А.А., Малинина Д.А., Колчанова В.Н., Шлык И.В., Полушин Ю.С., Ковальчук Ю.П. Место пресепсина в скрининге инфекции у пациентов в критическом состоянии. Вестник анестезиологии и реаниматологии. 2018;15(4):23-33. URL: https://doi.org/10.21292/2078-5658-2018-15-4-23-33.

2. .Батырбаева Д.Ж., Рамазанова Б.А., Бекназарова А., Алибаева Ж.С., Абдраимова А.А., Нурахова А.Д., Ибраева Н.К., Батырханова Р.С. Новый высокочувствительный и высокоспецифичный маркер неонатального сепсиса – пресепсин // Вестник Казахского Национального медицинского университета. 2016. № 4. - С. 275-282.

3. .Голуб И. Е. Сепсис: определение, диагностическая концепция, патогенез и интенсивная терапия: Учебное пособие / И.Е. Голубев, Л.В. Сорокина, Е. С. Нетесин. – Иркутск: ИГМУ, 2015. – 47с.

4. Катаева А.В.,Бахтина Ж.А. Сокращение признакового пространства в диагностики сепсиса // ИТНОУ: Информационные технологии в науке, образовании и управлении. 2018. № 5 (9). - С. 30-33.

5. .Козлов В.К. Сепсис, тяжелый сепсис, септический шок: патогенетическое обоснование диагноза, клиническая интерпретация, принцыпы и методы диагностики// Клинико-лабораторный консилиум. 2014. № 2 (49). - С. 20-40.

6. Лазаренко В.А. Сепсис: (современный взгляд на этиологию, патогенез, клинические варианты течения и лечение): учебное пособие для врачей-хирургов, реаниматологов, клинических ординаторов и хирургов-интернов. - Курск : Изд-во Курского гос. мед. ун-та, 2015. - 90 с.

7. Малярчук В.И. Курс лекция по общей хирургии: учебное пособие / В.И. Малярчук, Ю.Ф. Пауткин. – Казань, 2015. – 196с.

8. Никонов В.В., Соколов А.С., Феськов А.Э. Сепсис от древности до современности. Взгляд сквозь века//Медицина неотложных состояний. 2017. № 3 (82). - С. 73-81.

9. Патент RU2510510C1 РФ. «Тест-система для полуколичественного иммунохроматографического анализа»/ А. П. Осипов, В. В. Григоренко, И. П. Андреева, С. Э. Кондаков.// Бюллютень. – 2014. – № 1. – 10с.

10. Руднов В. А., Кулабухов В. В. Сепсис-3: обновлённые ключевые положения, потенциальные проблемы и дальнейшие практические шаги // Вестн. анестезиол. и реаниматол. - 2016. - № 4. - С. 3-18.

11. Руднов В. А., Кулабухов В. В. Эволюция представлений о сепсисе: история продолжается // Инфекции в хирургии. - 2015. - № 2. - С. 6-10.

12. Чеботкевич В. Н. Современные методы лабораторной диагностики сепсиса /В.Н. Чеботкевич, Е.И. Кайтанджан, В.В. Бурылев, Е.Е. Щетинкина //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. – 2013. – Т.15. - №4. – С. 295-300.

13. Щуплова Е.А., Стадников А.А., Фадеев С.Б. Роль биологических свойств Staphylococcus epidermidis во внутриэритроцитарной инвазии и изменении активности каталазы и супероксиддисмутазы эритроцитов при экспериментальной генерализованной инфекции. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2015; № 159 (1). –С. 79-82.

14. Щуплова Е. А., Черкасов С.В., Плотников А.О. Применение метода FISH для выявления бактерий локализованных на поверхности и внутри эритроцитов. Клиническая лабораторная диагностика, 2017, 62(7).- С.431-435.

15. Щуплова Е.А. Адаптация метода флуоресцентной in situ гибридизации для изучения взаимодействия микроорганизмов с эритроцитами. / Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. 2017. № 4. - С. 5.

16. Щуплова Е.А. Роль микробов-ассоциантов в процессах взаимодействий бактерий с эритроцитами // Вестник Оренбургского государственного университета. 2017. № 9 (209). - С. 111 – 114.

17. GustafssonAnna. Aspectsonsepsis: treatmentandmarkers.- Malmo, 2012.-73c.

18. Fleischmann C., Scherag A., Adhikari N.K. (2015) Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated sepsis—current estimates and limitations. Am J Respir Crit Care Med. doi: 10.1164/rccm.201504-0781OC

19. Wacker C., Prkno A., Brunkhorst F.M., Schlattmann P. Procalcitonin as a diagnostic marker for sepsis: a systematic review and meta-analysis. LancetInfectiousDiseases 2013;13 (5):426–435 р.

20. Сепсис: избранныевопросыдиагностикиилечения / подред. Н.В. Дмитриевой, И.Н. Петуховой, Е.Г. Громовой. – М. : ИД «АБВ-пресс», 2018. – 416 с.

21. Гельфанд Б.Р., Филимонов М.И., Бражник Т.Б., Сергеева Н.А., Бурневич С.З.Прокальцитонин: новый лабораторныйдиагностический маркер сепсиса игнойно-септических осложнений в хирургии // Вестник интенсивной терапии, 2003 г, №1. - С. 53.

22. Gramm H-J., Dollinger P., Beier W. Procalcitonin –a new marker of host inflammatory response. Longitudinal studies in patients with sepsis and peritonitis. // Chir. Gastroenterol. 1995; 11[Suppl]: 51-54р.

23. Wilson D.A., Joyce M.J., Hall L.S., et al. Multicenter evaluation of a Candida albicans peptide nucleic acid fluorescent in situ hybridization probe for characterization of yeast isolates from blood cultures. J Clin Microbiol2005; 43:2909-12.

24. Wellinghausen N., Wirths B., Essig A., Wassill L.Evaluation of the Hyplex BloodScreen multiplex PCRenzymelinked immunosorbent assay system for direct identification of gram-positive cocci and gram-negative bacilli from positive blood cultures. J Clin Microbiol2004; 42:3147-52.

25. Wellinghausen N., Kochem A-J., Disqué C., et al. Diagnosis of bacteremia in whole-blood samples by use of a commercial universal 16S rRNA gene-based PCR and sequence analysis. J Clin Microbiol 2009; 47(9):2759-65.

26. Lehmann L.E., Hunfeld K.P., Emrich T., et al. A multiplex real-time PCR assay for rapid detection and differentiation of 25 bacterial and fungal pathogens from whole blood samples. Med Microbiol Immunol 2008; 197:313-24.

27. Christopher Russell, Andrew C. Ward, Vincent Vezza, Paul Hoskisson, David Alcorn, D. Paul Steenson, Damion K. Corrigan. Development of a needle shaped microelectrode for electrochemical detection of the sepsis biomarker interleukin-6 (IL-6) in real time.// Biosensors and Bioelectronics. № 9. Volume126. 2018. - Р.806-814. URL: https://pureportal.strath.ac.uk/en/publications/development-of-a-needle-shaped-microelectrode-for-electrochemical

(Контактная информация: Мишучков Андрей Александрович – кандидат философских наук, доцент, учитель высшей категории, методист МАУДО «Центр детского творчества» Промышленного района г. Оренбурга; адрес: 460004 г. Оренбург, ул. Магнитогорская, 80; моб.тел. 8-987-876-52-25; е-mail: [email protected]

²Акопян Мариам Ромиковна - студент ординатуры 1 курса Оренбургского государственного медицинского университета; адрес: 460014, Россия, г. Оренбург, ул. Советская, 6; моб. тел. 8-919-852-60-96; е-mail: [email protected])

LITERATURA

1. Afanasyev A.A., Malinina D.A., Kolchanova V.N., Shlyk I.V., Polushin Yu.S., Kovalchuk Yu.P. The place of presepsin in the screening of infection in critically ill patients. Bulletin of anesthesiology and intensive care. 2018; 15 (4): 23-33. URL: https://doi.org/10.21292/2078-5658-2018-15-4-23-33.

2. Batyrbaeva D.Zh., Ramazanova B.A., Beknazarova A., Alibaeva J.S., Abdraimova A.A., Nurakhova A.D., Ibraeva N.K., Batyrkhanova R.S. A new highly sensitive and highly specific marker of neonatal sepsis - presepsin // Bulletin of the Kazakh National Medical University. 2016. No. 4. - S. 275-282.

3. Golub I. Ye. Sepsis: definition, diagnostic concept, pathogenesis and intensive therapy: Textbook / I.E. Golubev, L.V. Sorokina, E.S. Netesin. - Irkutsk: IGMU, 2015 .-- 47 p.

4. Kataeva A.V., Bakhtina Zh.A. Reduction of feature space in the diagnosis of sepsis // ITNOU: Information technology in science, education and management. 2018. No. 5 (9). - S. 30-33.

5. Kozlov V.K. Sepsis, severe sepsis, septic shock: pathogenetic substantiation of diagnosis, clinical interpretation, principles and methods of diagnosis // Clinical and laboratory consultation. 2014. No. 2 (49). - S. 20-40.

6. Lazarenko V.A. Sepsis: (a modern view of etiology, pathogenesis, clinical course options and treatment): a training manual for surgeons, resuscitators, clinical residents and intern surgeons. - Kursk: Publishing house of the Kursk state. honey. University, 2015 .-- 90 s.

7. Malyarchuk V.I. Course lecture on general surgery: a training manual / V.I. Malyarchuk, Yu.F. Pautkin. - Kazan, 2015 .-- 196s.

8. Nikonov V.V., Sokolov A.S., Feskov A.E. Sepsis from antiquity to modernity. A look through the centuries // Medicine of emergency conditions. 2017. No. 3 (82). - S. 73-81.

9. Patent RU2510510C1 of the Russian Federation. “Test system for semi-quantitative immunochromatographic analysis” / A.P. Osipov, V.V. Grigorenko, I.P. Andreeva, S.E. Kondakov. // Bulluten. - 2014. - No. 1. - 10s.

10. Rudnov V. A., Kulabukhov V. V. Sepsis-3: updated key points, potential problems and further practical steps // Tomsk State University Journal. anesthesiol. and resuscitation. - 2016. - No. 4. - S. 3-18.

11. Rudnov V. A., Kulabukhov V. V. The evolution of ideas about sepsis: the story continues // Infections in surgery. - 2015. - No. 2. - S. 6-10.

12. Chebotkevich V. N. Modern methods of laboratory diagnosis of sepsis / V.N. Chebotkevich, E.I. Kaitanjan, V.V. Burylev, E.E. Schetinkina // Clinical Microbiology and Antimicrobial Chemotherapy. - 2013. - T.15. - No. 4. - S. 295-300.

13. Schuplova EA, Stadnikov AA, Fadeev S.B. The role of the biological properties of Staphylococcus epidermidis in intraerythrocytic invasion and changes in the activity of catalase and superoxide dismutase of erythrocytes in experimental generalized infection. Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2015; No. 159 (1). -WITH. 79-82.

14. Schuplova E.A., Cherkasov S.V., Plotnikov A.O. The use of the FISH method for the detection of bacteria localized on the surface and inside of red blood cells. Clinical Laboratory Diagnostics, 2017, 62 (7) .- P.431-435.

15. Schuplova EA Adaptation of the method of fluorescent in situ hybridization to study the interaction of microorganisms with red blood cells. / Bulletin of the Orenburg Scientific Center of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences. 2017. No. 4. - S. 5.

16. Schuplova EA The role of associate microbes in the processes of interaction of bacteria with red blood cells // Bulletin of the Orenburg State University. 2017. No. 9 (209). - S. 111 - 114.

17. GustafssonAnna. Aspectsonsepsis: treatmentandmarkers.- Malmo, 2012.-73c.

18. Fleischmann C., Scherag A., Adhikari N.K. (2015) Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated sepsis — current estimates and limitations. Am J Respir Crit Care Med. doi: 10.1164 / rccm.201504-0781OC

19. Wacker C., Prkno A., Brunkhorst F.M., Schlattmann P. Procalcitonin as a diagnostic marker for sepsis: a systematic review and meta-analysis. LancetInfectiousDiseases 2013; 13 (5): 426-435 p.

20. Sepsis: selected issues of diagnosis and treatment / ed. N.V. Dmitrieva, I.N. Petukhovoi, E.G. Thunderous. - M.: Publishing House ABV-Press, 2018. - 416 p.

21. Gelfand BR, Filimonov MI, Brazhnik TB, Sergeeva NA, Burnevich SZ Procalcitonin: a new laboratory diagnostic marker of sepsis of needle-septic complications in surgery // Bulletin of intensive care , 2003, No. 1. - S. 53.

22. Gramm H-J., Dollinger P., Beier W. Procalcitonin –a new marker of host inflammatory re-sponse. Longitudinal studies in patients with sepsis and peritonitis. // Chir. Gastroenterol. 1995; 11 [Suppl]: 51-54r.

23. Wilson D.A., Joyce M.J., Hall L.S., et al. Multicenter evaluation of a Candida albicans peptide nucleic acid fluorescent in situ hybridization probe for characterization of yeast isolates from blood cultures. J Clin Microbiol2005; 43: 2909-12. Wellinghausen N., Wirths B., Essig A., Wassill L.Evaluation of the Hyplex BloodScreen multiplex PCRenzymelinked immunosorbent assay system for direct identification of gram-positive cocci and gram-negative bacilli from positive blood cultures. J Clin Microbiol2004; 42:3147-52.

24. Wellinghausen N., Wirths B., Essig A., Wassill L.Evaluation of the Hyplex BloodScreen multiplex PCRenzymelinked immunosorbent assay system for direct identification of gram-positive cocci and gram-negative bacilli from positive blood cultures. J Clin Microbiol2004; 42:3147-52.

25. Wellinghausen N., Kochem A-J., Disqué C., et al. Diagnosis of bacteremia in whole-blood samples by use of a commercial universal 16S rRNA gene-based PCR and sequence anal-ysis. J Clin Microbiol 2009; 47(9):2759-65.

26. Lehmann L.E., Hunfeld K.P., Emrich T., et al. A multiplex real-time PCR assay for rapid detection and differentiation of 25 bacterial and fungal pathogens from whole blood samples. Med Microbiol Immunol 2008; 197:313-24.

27. Christopher Russell, Andrew C. Ward, Vincent Vezza, Paul Hoskisson, David Alcorn, D. Paul Steenson, Damion K. Corrigan. Development of a needle shaped microelectrode for electrochemical detection of the sepsis biomarker interleukin-6 (IL-6) in real time.// Bio-sensors and Bioelectronics. № 9. Volume126. 2018. - Р.806-814. URL: https://pureportal.strath.ac.uk/en/publications/development-of-a-needle-shaped-microelectrode-for-electrochemical

Образец ссылки на статью:

Мишучков А.А., М.Р. Акопян. Сепсис: сравнительный анализ методов диагностики. Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. 2019. 2: 12с. [Электр. ресурс] (URL: ).

DOI: 10.24411/2304-9081-2019-12002.

DOI: 10.24411/2304-9081-2019-12002 15