Анализ гидразидного состава экстракта календулы

e-mail: [email protected]

Аннотация.

Актуальность. В настоящее время наблюдается значительное возрастание спроса на эффективные препараты растительного происхождения. Это обусловлено тем, что они обладают рядом неоспоримых преимуществ: низкой токсичностью, возможностью длительного применения без риска возникновения побочных явлений, мягкостью и надёжностью действия. Именно поэтому лекарственные средства на основе растительного сырья находят всё большее применение в современной фармакотерапии. В данной статье приводится качественный и количественный анализ гидразидного состава экстрактов календулы, приготовленных различными способами.

Цель исследования. Сравнительный анализ гликозидного (флавоноидного) состава жидких лекарственных форм, содержащих календулу лекарственную в качестве исходного сырья.

Были поставлены следующие задачи:

• изучить различные методы экстракции лекарственного растительного сырья;

• получить жидкие лекарственные формы из цветков календулы лекарственной;

• определить оптимальные условия дляэкстрагирования цветков календулы лекарственной;

• установить содержание экстрактивных веществ в полученных лекарственных формах;

• провести качественный и количественный анализ;

• подтвердить наличие флавоноидных соединений с помощью УФ-спектроскопии;

• сравнить содержание суммы флавоноидов в жидких лекарственных формах на основе календулы лекарственной.

Методы. Для достижения поставленной цели были изучены методы экстрагирования лекарственного растительного сырья, проанализирована научная литература по теме исследования, проведен качественный и количественный анализ, рассмотрены полученные УФ-спектры.

Результаты. В результате получены жидкие лекарственные формы из цветков календулы лекарственной двумя разными методами, с применением различных рецептур, экстракция осуществлялась методом мацерации и циркуляционным экстрагированием в аппарате Сокслета, в соотношениях 1:5 и 1:10, также использовались разные концентрации этилового спирта (40%.70%,96%). Определены оптимальные условия экстрагивания – для данного сырья наилучшие показатели были достигнуты при получении лекарственной формы с помощью экстрактора Сокслета, кроме того, по данным эксперимента, концентрация этилового спирта, которая извлекает больше целевых компонентов составляет 70%, наиболее эффективным соотношением является 1:5.

Ключевые слова: гликозиды, флавоноиды, лекарственное растительное сырье, экстракция, мацерация, экстрактор Сокслета, календула лекарственная, жидкие лекарственные формы, настойки.

Конфликт интересов: авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Analysis of the hydrazide composition of calendula extract

Karina F. Yankiv¹, Maria S. Evdokimova¹, Maria I. Gorelova¹

¹ Southwest State University ,

50 let Oktyabrya Str., 94, Kursk 305040, Russian Federation

e-mail: [email protected]

Abstract.

Relevance. Currently, there is a significant increase in demand for effective drugs of plant origin. This is due to the fact that they have a number of undeniable advantages: low toxicity, the possibility of long-term use without the risk of side effects, mildness and reliability of action. That is why drugs based on plant raw materials are increasingly used in modern pharmacotherapy. This article presents qualitative and quantitative analysis of hydrazide composition of calendula extracts prepared by different methods.

Purpose. The aim of the article is to comparatively analyse the glycoside (flavonoid) composition of liquid dosage forms containing calendula medicinalis as an initial raw material.

The following objectives were set:

- to study various methods of extraction of medicinal plant raw materials;

- to obtain liquid dosage forms from calendula flowers;

- to determine the optimal conditions for extraction of marigold flowers;

- to determine the content of extractive substances in the obtained dosage forms;

- conduct qualitative and quantitative analyses;

- confirm the presence of flavonoid compounds using UV spectroscopy;

- compare the amount of flavonoids in liquid dosage forms based on calendula officinalis.

Methods. To achieve this goal, methods of extracting medicinal plant raw materials were studied, the scientific literature on the research topic was analyzed, qualitative and quantitative analysis was carried out, and the UV spectra obtained were considered.

Results. As a result, liquid dosage forms were obtained from calendula officinalis flowers by two different methods, using different formulations, extraction was carried out by maceration and circulating extraction in a Soxlet apparatus, in ratios of 1:5 and 1:10, different concentrations of ethyl alcohol were also used (40% .70%,96%). Optimal extraction conditions were determined – for this raw material, the best indicators were achieved when obtaining the dosage form using the Soxlet extractor, in addition, according to the experiment, the concentration of ethyl alcohol, which extracts more target components, is 70%, the most effective ratio is 1:5.

Keywords: glycosides, flavonoids, medicinal plant raw materials, extraction, maceration, Soxlet extractor, calendula officinalis, liquid dosage forms, tinctures.

Введение.

В настоящее время наблюдается значительное возрастание спроса на эффективные препараты растительного происхождения. Это обусловлено тем, что они обладают рядом неоспоримых преимуществ: низкой токсичностью, возможностью длительного применения без риска возникновения побочных явлений, мягкостью и надёжностью действия. Именно поэтому лекарственные средства на основе растительного сырья находят всё большее применение в современной фармакотерапии. Лекарственные растения, как правило, обладают целым комплексом биологически активных веществ. Они содержат различные флавоноиды, каратиноиды, дубильные вещества, эфирные масла, алкалоиды.

Календула лекарственная (Calendula officinalis) является растением, которое массово культивируется на территории нашей страны. Это недорогое и доступное сырье, к достоинствам которого также относится состав, насыщенный различными биологически активными веществами. Календула является высокоперспективным ресурсом для получения лекарственных препаратов.

Эффективность лекарственных средств на основе календулы лекарственной определяется, прежде всего, флавоноидным составом, именно поэтому определение и сравнение содержания суммы флавоноидов в самостоятельно приготовленных лекарственных формах и препаратах фармацевтического производства является целесообразным и актуальным.

Наибольшее количество флавоноидов накапливается у многих растений в фазе цветения [16].

Лекарственные средства на основе календулы активно используются в медицине, так как данное растение содержит целый комплекс биологически активных веществ. В качестве лекарственного растительного сырья используют цветки календулы, которые содержат флавоноиды, каратиноиды, эфирные масла, дубильные вещества, органические кислоты. Благодаря уникальному химическому составу препараты календулы лекарственной обладают антисептическим, антимикробным, противовоспалительным и успокаивающим действием.

Материалы и методы. Для достижения поставленной цели были изучены методы экстрагирования лекарственного растительного сырья, проанализирована научная литература по теме исследования, проведен качественный и количественный анализ, рассмотрены полученные УФ-спектры.

Результаты и их обсуждение.

1. Определение массовой доли влаги в лекарственном растительном сырье.

Влажность или массовая доля влаги является важнейшим для оценки качества сырья. Под влажностью понимают потерю в массе при высушивании за счет удаления гигроскопической влаги и летучих веществ. Данный показатель определяется методом гравиметрии путем высушивания до постоянной массы лекарственного растительного сырья. Определение массовой доли влаги в лекарственном растительном сырье проводилось в соответствии с ОФС.1.5.3.0007.15 [20].

Аналитическую пробу сухого лекарственного растительного сырья измельчают (при необходимости) до размера частиц не более 10 мм. Затем с помощью взвешивания отбирают точную навеску 2-3 г и помещают ее в предварительно высушенный до постоянной массы, взвешенный бюкс, ставят в сушильный шкаф, нагретый до 100-105 . Высушивание проводят в открытых бюксах со снятыми крышками, при взвешивании бюксы должны быть закрыты.

Первое взвешивание анализируемых образцов, представленных листьями, травами или цветками лекарственного растительного сырья проводят через 2 часа. Перед взвешиванием бюкс с навеской охлаждают в эксикаторе в течение 30 минут. Высушивание лекарственного растительного сырья проводят до достижения постоянной массы. Она считается достигнутой, если разница между двумя последовательными взвешиваниями после дополнительного высушивания и охлаждения в эксикаторе не превышает 0,01 г.

Расчет массовой доли влаги проводят по формуле, представленной ниже:

где: – масса бюксы с навеской до высушивания, г;

– масса бюксы с навеской после высушивания, г;

m – масса навески до высушивания, г.

В качестве исходного сырья были использованы высушенные цветки календулы лекарственной. После проведения соответствующего эксперимента была вычислена влажность сухого сырья календулы лекарственной. В результате проведенного опыта и расчета установлено, что массовая доля влаги в сухих цветках календулы лекарственной составляет 11%.

В соответствии с фармакопейной статьей на данный вид сырья (ФС.2.5.0030.15) [28] показатель массовой доли влаги находится в пределах нормы.

2. Получение жидких лекарственных форм из сухого лекарственного растительного сырья.

Получение жидких лекарственных форм из лекарственного растительного сырья проводилось методом экстракции. В качестве сырья были использовались сухие цветки календулы лекарственной. Экстрагент – спирт этиловый.

При получении спиртовых настоек из сухого лекарственного растительного сырья были применены различные способы экстракции, также были использованы разные параметры, влияющие на полноту экстракции. Результаты представлены в таблицах 1-2.

Таблица 1. Параметры экстрагирования

Table 1. Extraction parameters

Таблица 2. Рецептуры приготовления настоек календулы лекарственной

Table 2. Recipes for the preparation of calendula medicinal tinctures

Были получены спиртовые настойки из сухих цветков календулы лекарственной по различным рецептурам.

Экстрагирование методом мацерации проводилось в течение трех суток в прохладном, защищенном от света месте. Кроме того, для получения жидких лекарственных форм был применен метод циклической экстракции, он осуществлялся с помощью аппарата Сокслета, в течение 6 часов – 2 последовательных цикла по 3 часа каждый. Результаты представлены в таблицах 3-4.

Таблица 3. Материальный баланс экстрагирования сухого лекарственного сырья календулы лекарственной в экстракторе Сокслета 40% этиловым спиртом

Table 3. Material balance of extraction of dry medicinal raw materials of calendula officinalis in the Soxlet extractor with 40% ethyl alcohol

Таблица 4. Материальный баланс экстрагирования сухого лекарственного сырья календулы лекарственной в экстракторе Сокслета 70% этиловым спиртом

Table 4. Material balance of extraction of dry medicinal raw materials of calendula officinalis in the Soxlet extractor with 70% ethyl alcohol

3. Содержание экстрактивных веществ

Качество приготовленных жидких лекарственных форм устанавливали по сумме экстрактивных веществ. Результаты определения содержания экстрактивных веществ занесли в таблицу 5.

Таблица 5. Результаты определения экстрактивных веществ

Table 5. Results of determination of extractive substances

Из данных таблицы следует, что наибольшей экстрактивностью обладают жидкие лекарственные формы, полученные методом циклической экстракции с помощью аппарата Сокслета – 81,2% и 72,3% соответственно, это хорошо видно на диаграмме (рис. 1).

Рис. 1. Экстрактивность

Fig. 1. Extractivity

4. Определение экстрактивных веществ в жидких лекарственных формах.

Под экстрактивными веществами понимают массу сухого остатка, полученного после упаривания вытяжки из лекарственного растительного сырья, экстрагированной растворителем, указанным в нормативной документации на данный вид сырья. Определение экстрактивных веществ осуществлялось в соответствии с ОФС.1.5.3.0006.15 [20].

Определение содержания экстрактивных веществ проводят гравиметрическим методом. Различают однократную и многократную экстракцию, поэтому расчет ведут исходя из того, как именно получали лекарственный растительный препарат.

При однократной экстракции (сырьё однократно обрабатывалось экстрагентом) 25 мл полученного экстракта переносят в предварительно высушенную до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку, выпаривают содержимое на водяной либо песчаной бане досуха. Затем чашку с сухим остатком сушат при температуре 100-105 в сушильном шкафу до постоянной массы и охлаждают в эксикаторе в течение 30 минут, после чего взвешивают.

Содержание экстрактивных веществ в лекарственном растительном препарате, полученном с помощью однократной экстракции рассчитывают по формуле:

где: m – масса сухого остатка, г;

a – навеска лекарственного растительного сырья, г;

V–объем экстрагента, мл;

W– влажность лекарственного растительного сырья, %;

Многократная экстракция предполагает последовательную обработку сырья одним и тем же экстрагентом с последующим получением суммарного экстракта. Получение вытяжки из лекарственного растительного сырья в экстракторе Сокслета является наглядным примером многократной экстракции. Методика проведения эксперимента идентична первому способу, различается расчет, так как при получении вытяжки сырье несколько раз подвергается воздействию экстргента.

Содержание экстрактивных веществ в лекарственном растительном препарате, полученном с помощью многократной экстракции рассчитывают по формуле:

где: m – масса сухого остатка, г;

a – навеска лекарственного растительного сырья, г;

W– влажность лекарственного растительного сырья, %;

n– число экстракций (циклов);

V–объем экстрагента, мл.

Результаты качественных реакций

Для качественного анализа были использованы жидкие лекарственные формы, изготовленные самостоятельно, а также лекарственные растительные препараты – экстракт «Ротокан» и календулы лекарственной настойка спиртовая (1:10).

В результате проведения качественных реакций получены характерные результаты реакций во всех анализируемых образцах, подтверждающие присутствие флавоноидов. Результаты представлены в таблицах 6 – 9.

Изменение окраски в пробирке под действием различных реактивов характерно для всех флавоноидных соединений.

Таблица 6. Результаты цианидиновой пробы.

Table 6. Cyanidin test results.

Таблица 7. Результаты качественных реакций с 2% раствором щелочи.

Table 7. Results of qualitative reactions with 2% alkali solution.

Таблица 8. Результаты качественных реакций с треххлорным железом.

Table 8. Results of qualitative reactions with iron trichloride.

Таблица 9. Реакция с ацетатом свинца (свинец уксуснокислый средний).

Table 9. Reaction with lead acetate (lead acetic acid medium).

5. Результаты тонкослойной хроматографии.

Тонкослойная хроматография проводилась на хроматографической пластине в системе хлороформ-метанол-вода (26:14:3). Результаты приведены в таблице 10.

Таблица 10. Результаты тонкослойной хроматографии

Table 10. Results of thin-layer chromatography

При сравнении полученных значений со значением Rf рутина – 0,45 0,01 можно сделать вывод, что данное флавоноидное соединение содержится во всех анализируемых образцах. На хроматограммах даже до их проявления можно наблюдать отчетливые желтые пятна, что является характерным для флавоноидов. При проявлении полученных хроматограмм 2% спиртовым раствором AlCl₃ окраска пятен усиливается, в УФ – свете наблюдается флуоресценция.

6. Результаты спектрофотометрического анализа.

Наличие флавоноидных соединений во всех анализируемых образцах подтверждается результатами УФ-спектроскопии. Большинство флавоноидов на УФ-спектрах имеют интенсивный максимум поглощения при 289 нм.

Полученные УФ-спектры всех анализируемых образцов представлены ниже (рис. 2-11).

7. Результаты определения суммы флавоноидов.

В ходе проведения эксперимента, анализируемые растворы фотометрировали, после чего вычислили суммарное содержание флавоноидов в каждой лекарственной форме, результаты приведены в таблице 11.

Таблица 11. Результаты определения суммы флавоноидов

Table 11. Results of determining the amount of flavonoids

Рис. 12. Содержание суммы флавоноидов в жидких лекарственных формах, полученных различными способам

Fig. 12. The content of the sum of flavonoids in liquid dosage forms obtained by various methods

Рис. 13. Сравнение содержания суммы флавоноидов в некоторых лекарственных формах

Fig. 13. Comparison of the amount of flavonoids in some dosage forms

Из данных представленных выше (табл.11), (рис. 12-13) следует, что наибольшее количество флавоноидов извлекается с помощью экстрактора Сокслета. Кроме того, наиболее оптимальная концентрация спирта составляет 70%, так как при ней значения суммы флавоноидов достаточно высокие результаты при всех соотношениях сырья и экстрагента. Самостоятельно изготовленная спиртовая настойка календулы лекарственной на 70% этиловом спирте 1:10 (мацерация) практически не уступает аптечной лекарственной форме по содержанию суммы флавоноидов.

Во всех анализируемых растворах при соотношении сырье: экстрагент - 1:5 были получены хорошие результаты, поэтому использование данного соотношения при изготовлении жидких лекарственных форм календулы лекарственной целесообразно.

Наибольшее количество флавоноидных соединений наблюдается в экстракте «Ротокан», это объясняется тем, что данный лекарственный растительный препарат является суммарным, то есть содержит кроме календулы лекарственной еще ромашку и тысячелистник, что влияет на его свойства и увеличивает содержание флавоноидов. Данный экстракт получают в соотношении 1:1, что, безусловно, влияет на результат – это более концентрированная лекарственная форма

Выводы. Таким образом, были изучены изменения гликозидного (флавоноидного состава) в лекарственных формах, приготовленных самостоятельно по различным рецептурам и препаратах, полученных на фармацевтическом производстве, определены оптимальные условия экстрагирования – для данного сырья наилучшие показатели были достигнуты при получении лекарственной формы с помощью экстрактора Сокслета, кроме того, по данным эксперимента, концентрация этилового спирта, которая извлекает больше целевых компонентов составляет 70%, наиболее эффективным соотношением является 1:5.

Список литературы

1. Aljancic I, Vajs V, Menkovic N, Karadzic I, Juranic N, Milosavljevic S, Macura S. Flavones and sesquiterpene lactones from Achillea atrata subsp. multifi da: antimicrobial activity // J. Nat. Prod. 1999. Vol. 62(6). P. 909 –11.

2. The Flavonoids: Advances and Research / Ed. by J.B. Harborne, T.J. Mabry. – London: Chapman and Hall, 1982. – 744 p.

3. Багирова, В.Л. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе / В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, Н.П. Садчикова // Хим. – фарм. журн. – 2001. Т. 34, № 11. – С. 46 – 47.

4. Бандюкова, В.А. Исследование флавоноидов некоторых видов растений семейства сложноцветных, бурачниковых и бересклетовых /В.А. Бандюкова, С.Ф. Джумырко, Н.В. Сергеева, А.Л. Шинкаренко // Труды первого всесоюзного съезда фармацевтов: Пятигорск, 14-19 сент. 1967 г. – М.: 1970. – С. 253-258.

5. Березов, Т.Т., Коровкин, Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 2003.

6. Гончаренко, Г.К. Экстракция лекарственных веществ из растительного сырья: автореф. дис. д-ра фарм. наук: 15.00.02 / Г.К. Гончаренко, 1972. С. 24 – 29.

7. Государственная фармакопея РФ. XIII издание. Т.1 / М. 2015. – 1470 с.

1. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений. Учеб. пособие для фарм. вузов / Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина, В.А. Ермакова и др. – М.: Высшая школа, 1983. – 176 с.

2. Дрозд, Г.А., Дрозд, Н.Г. Лекарственные растения, содержащие флавоноиды: ограничения для применения. // Сборник работ 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН. В 2-х частях. Часть II. – Курск: КГМУ. – 2002. – С. 215 – 216.

3. Карпук, В. В. Фармакогнозия: Учебное пособие. //Минск: БГУ, 2011. – 256 – 261 с.

4. Киселева, Т.Л. Лекарственные растения в мировой медицинской практике: государственное регулирование номенклатуры и качества/ Т.Л. Киселева, Ю.А. Смирнова. – М.: Издательство профессиональной ассоциации натуротерапевтов, 2009. – 295с.

5. Кузнецова, М. А. Лекарственное растительное сырье и препараты: Справ. пособие для хим.-технол. техникумов, фарм. и мед. Училищ. – 2-е изд. перераб. и доп. – М.: Высш. шк., 2004. –191 с.

6. Куркин, В.А. Актуальные аспекты создания импортозамещающих лекарственных растительных препаратов/ В.А. Куркин, И.К. Петрухина // Фундаментальные исследования. – 2014. – №11. – С. 366 – 371.

7. Ладыгина, Е.Я. Календула лекарственная / Е.Я. Ладыгина // Фармация. – 1992. – Т.40. № 4. – С. 84 – 86.

8. Ладыгина, Е.Я., Сафронич, Н.И. и др. Химический анализ лекарственных растений: Учебное пособие для фармацевтических вузов. // М.: Высшая Школа, 1983. – 176 с.

9. Леонова, М.В., Климочкин, Ю.Н. Экстракционные методы изготовления лекарственных средств из растительного сырья: учебно-методическое пособие / – Самара: Самаp. гос. техн. ун-т. 2012. – 111 c.

10. Майский, В.В Элементарная фармакология: учеб. пособие – М.: «Центр развития межсекторальных программ», 2009. – 325с.

11. Мирович, В.М., Привалова, Е.Г. Биологически активные вещества растений (полисахариды, эфирные масла, фенологликозиды, кумарины, флавоноиды): Учебное пособие/ФГБОУ ВО Иркутский государственный медицинский университет МЗ РФ, кафедра фармакогнозии и фармацевтической технологии. – Иркутск: ИГМУ, 2018. – 70 с.

12. Олешко, Г.И. Перспективы использования лекарственных средств календулы лекарственной и земляники лесной / Г.И. Олешко, Г.А. Иванова, И.В. Крапивина, В.Ф. Левинова, О.В. Петухова // Человек и лекарство: Тез. докл. XI Рос. нац. конгр., Москва, 2004 г. – М., 2004. – С. 672.

13. Омельчук, М.А. Календула лекарственная - источник сырья для новых лекарственных препаратов / М.А. Омельчук / Современные методы исследования лекарственных растений: Научные труды. Т. XX. – М., 1983. –С.188 – 192.

14. ОФС.1.5.3.0007.15 Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах// Государственная фармакопея РФ, XIII издание, Т.2/М. 2015.

15. Пономарев, В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья / В.Д. Пономарев. – М.: Медицина, 1976. – 238 с.

16. Салова, Т.Ю., Громова, Н.Ю. Теоретические основы получения биологически активных веществ из растительного и животного сырья. // Успехи современного естествознания. – 2016. – № 3. – С. 39 – 43.

17. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учебное пособие: в 2-х томах / И.А. Самылина, О.Г. Аносова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. – Т. 1. – 192 с.

18. Саушкина, А.С., Карпенко, В.А., Савченко, Л.Н., Муравьева, Д.А. Использование ТСХ для идентификации биологически активных веществ в некоторых видах лекарственного сырья // Сорбционные и хроматографические процессы. 2001. Т.1. Вып. 5. С. 902 – 905.

19. Смирнова, Л.П. Особенности применения стандартного образца рутина в анализе растительного сырья, витаминных и фитопрепаратов / Л.П. Смирнова, С.С. Николаева, В.А. Быков, Л.В. Яковлева и др. // Химико-фармацевтический журнал. – 2000. Т. 34. № 1. С. 29 – 31.

20. Тырков, А.Г. Выделение и анализ биологически активных веществ: Учебное пособие. // М.: КНОРУС, Астрахань, АГУ, ИД «Астраханский университет», 2016. – 69 – 83 с.

21. Фадеева, О.В. Исследование некоторых представителей семейства Астровых (сложноцветных) на содержание флавоноидов / О.В. Фадеева // III Всесоюзный съезд фармацевтов: Тез. докл., Кишенев, 14-17 окт. 1980г. –Кишенев «Тимпул», 1980. С. 194 –195.

22. ФС.2.5.0030.15 Ноготков лекарственных цветки // Государственная фармакопея РФ, XIII издание, Т.3/М. – 2015

23. Халецкий, А. М. Фармацевтическая химия. – Л.: «Медицина»,  1966. – 748 с.

24. Хишова, О.М. Современные направления создания лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья / О.М. Хишова // Вестник фармации. – Витебск. – 2004. – №2 (24). – С. 21 – 25.

25. Шарова, О.В., Куркин, В.А. Флавоноиды цветков календулы лекарственной // Химия растит. сырья. 2007. № 1. С. 65 – 68.

26. Шинкаренко, А.Б. Методы исследования природных флавоноидов. // Пятигорск, 1977. – 177 с.

27. Янкив, К.Ф., Лебедева, М.С., Яхнева, В.О. Элементы методики профориентационной работы во взаимосвязи химии и медицины. // В сборнике: Поколение будущего: взгляд молодых учены – 2020. Сборник научных статей 9-й Международной молодежной научной конференции. Курск, 2020. С. 82–85.

References

1. Aljancic I, Vajs V, Menkovic N, Karadzic I, Juranic N, Milosavljevic S, Macura S. Flavones and sesquiterpene lactones from Achillea atrata subsp. multifi da: antimicrobial activity // J. Nat. Prod. 1999. Vol. 62(6). P. 909—11.

2. The Flavonoids: Advances and Research / Ed. by J.B. Harborne, T.J. Mabry. -London: Chapman and Hall, 1982. - 744 p.

3. Bagirova, V.L. On standardization of medicines at the present stage / V.L. Bagirova, E.L. Kovaleva, N.P. Sadchikova // Chem. – pharm. journal. – 2001. Vol. 34, No. 11. – pp. 46-47.

4. Bandyukova, V.A. Research of flavonoids of some species of plants of the family of compound flowers, borage and bereskletovyh /V.A. Bandyukova, S.F. Dzhumyrko, N.V. Sergeeva, A.L. Shinkarenko // Proceedings of the first All-Union Congress of pharmacists: Pyatigorsk, September 14-19, 1967 – M.: 1970. – pp. 253-258.

5. Berezov, T.T., Korovkin, B.F. Biological chemistry. – M.: Medicine, 2003.

6. Goncharenko, G.K. Extraction of medicinal substances from plant raw materials: abstract of the dissertation of Dr. pharm. sciences: 15.00.02 / G.K. Goncharenko, 1972. pp. 24 – 29.

7. State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIII edition. Vol.1 / M. 2015. – 1470 p.

8. Grinkevich, N.I. Chemical analysis of medicinal plants. Study guide for pharm. universities / N.I. Grinkevich, I.A. Balandina, V.A. Ermakova, etc. – M.: Higher School, 1983. – 176 p.

9. Drozd, G.A., Drozd, N.G. Medicinal plants containing flavonoids: restrictions for use. // Collection of papers of the 68th final scientific session of KSMU and the Department of Biomedical Sciences of the Central Chernozem Scientific Center of the Russian Academy of Medical Sciences. In 2 parts. Part II. – Kursk: KSMU. – 2002. – pp. 215 – 216.

10. Karpuk, V. V. Pharmacognosy: Textbook. //Minsk: BSU, 2011. – 256 – 261 p.

11. Kiseleva, T.L. Medicinal plants in world medical practice: state regulation of nomenclature and quality/ T.L. Kiseleva, Yu.A. Smirnova. – M.: Publishing House of the Professional Association of Natural Therapists, 2009. – 295 s.

12. Kuznetsova, M. A. Medicinal plant raw materials and preparations: Reference. manual for chemical.-technol. technical schools, farms. and honey. Schools. – 2nd ed. reprint. and additional - M.: Higher School, 2004. -191 p.

13. Kurkin, V.A. Actual aspects of the creation of import-substituting medicinal herbal preparations/ V.A. Kurkin, I.K. Petrukhina // Fundamental research. – 2014. – No.11. – pp. 366-371.

14. Ladygina, E.Ya. Calendula officinalis / E.Ya. Ladygina // Pharmacy. – 1992. – Vol. 40. No. 4. – pp. 84-86.

15. Ladygina, E.Ya., Safronich, N.I. et al. Chemical analysis of medicinal plants: A textbook for pharmaceutical universities. // M.: Higher School, 1983. – 176 p.

16. Leonova, M.V., Klimochkin, Yu.N. Extraction methods of manufacturing medicines from plant raw materials: an educational and methodological manual / – Samara: Samara State Technical University. un-T. 2012. – 111 p.

17. Maisky, V.V. Elementary pharmacology: studies. manual – M.: "Center for the Development of intersectoral programs", 2009. – 325 s.

18. Mirovich, V.M., Privalova, E.G. Biologically active substances of plants (polysaccharides, essential oils, phenologycosides, coumarins, flavonoids): Textbook/Irkutsk State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation, Department of Pharmacognosy and Pharmaceutical Technology. – Irkutsk: IGMU, 2018. – 70 p.

19. Oleshko, G.I. Prospects for the use of medicinal products of calendula officinalis and wild strawberries / G.I. Oleshko, G.A. Ivanova, I.V. Krapivina, V.F. Levinova, O.V. Petukhova // Man and medicine: Tez. dokl. XI Russian National Congress, Moscow, 2004 – M., 2004. – p. 672.

20. Omelchuk, M.A. Calendula officinalis - a source of raw materials for new medicines / M.A. Omelchuk / Modern methods of research of medicinal plants: Scientific works. Vol. XX. – M., 1983. –p.188 – 192.

21. OFS.1.5.3.0007.15 Determination of the content of extractive substances in medicinal plant raw materials and medicinal plant preparations// State Pharmacopoeia of the Russian Federation, XIII edition, Vol.2/M. 2015.

22. Ponomarev, V.D. Extraction of medicinal raw materials / V.D. Ponomarev. – M.: Medicine, 1976. – 238 p.

23. Salova, T.Yu., Gromova, N.Yu. Theoretical foundations of obtaining biologically active substances from plant and animal raw materials. // Successes of modern natural science. – 2016. – No. 3. – pp. 39-43.

24. Samylina, I.A. Pharmacognosy. Atlas: textbook: in 2 volumes / I.A. Samylina, O.G. Anosova. – M.: GEOTAR-Media, 2007. – Vol. 1. – 192 p.

25. Saushkina, A.S., Karpenko, V.A., Savchenko, L.N., Muravyeva, D.A. The use of TLC for the identification of biologically active substances in some types of medicinal raw materials // Sorption and chromatographic processes. 2001. Vol.1. Issue 5. pp. 902 – 905.

26. Smirnova, L.P. Features of the use of a standard sample of rutin in the analysis of plant raw materials, vitamin and phytopreparations / L.P. Smirnova, S.S. Nikolaeva, V.A. Bykov, L.V. Yakovleva, etc. // Chemico-pharmaceutical journal. – 2000. Vol. 34. No. 1. pp. 29-31.

27. Tyrkov, A.G. Isolation and analysis of biologically active substances: A textbook. // M.: KNORUS, Astrakhan, ASU, Publishing house "Astrakhan University", 2016. – 69 – 83 p.

28. Fadeeva, O.V. The study of some representatives of the Aster (compound–colored) family on the content of flavonoids / O.V. Fadeeva // III All-Union Congress of Pharmacists: Tez. dokl., Kishenev, Oct 14-17, 1980 - Kishenev "Timpul", 1980. pp. 194 -195.

29. FS.2.5.0030.15 Medicinal marigolds flowers // State Pharmacopoeia of the Russian Federation, XIII edition, Vol.3/M. – 2015.

30. Khaletsky, A.M. Pharmaceutical chemistry. – L.: "Medicine", 1966. – 748 p.

31. Hishova, O.M. Modern directions of creation of medicines based on medicinal plant raw materials / O.M. Hishova // Bulletin of Pharmacy. – Vitebsk. – 2004. – №2 (24). – Pp. 21-25.

32. Sharova, O.V., Kurkin, V.A. Flavonoids of calendula officinalis flowers // Chemistry of plants. raw materials. 2007. No. 1. pp. 65-68.

33. Shinkarenko, A.B. Methods of research of natural flavonoids. // Pyatigorsk, 1977. – 177 p.

34. Yankiv, K.F., Lebedeva, M.S., Yakhneva, V.O. Elements of the methodology of career guidance work in the relationship of chemistry and medicine. // In the collection: The generation of the future: the view of young scientists – 2020. Collection of scientific articles of the 9th International Youth Scientific Conference. Kursk, 2020. pp. 82-85.

Информация об авторах/ Information about the authors