Практическая работа №9 ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОКРАШЕННОМ СОСТОЯНИИ (ПРОСТОЙ СПОСОБ ОКРАСКИ)

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №9

ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОКРАШЕННОМ СОСТОЯНИИ

Цель занятия. Проведение окрашивания микроорганизмов простым способом.

Студент должен знать

1.Простые и сложные методы окраски бактерий.

Студент должен уметь

1. Приготовить мазок-препарат, окрашенный простым способом.

2. Провести микроскопию в светлом поле.

3. Провести дезинфекцию и утилизацию.

Материалы и оборудование. Микроскоп с конденсорами светлого поля. Предметные стекла, спиртовка, спички, красители (водный раствор фуксина, метиленовый синий), штатив, бактериальная петля, пинцет, промывалка с водой или колба с водой и пипеткой, фильтровальная бумага.

Задание 1

Используя текст теоретической части работы составьте схему-алгоритм «Техника приготовления мазка»

Задание 2

1.Подготовить рабочее место к работе.

2.Приготовить два мазка препарата зубного налета:

• небольшое количество зубного налета снять острым концом спички или зубочистки (материал берут из межзубных промежутков или у шейки зуба);

• растереть на обезжиренном предметном стекле круг диаметром около 1 см (растирают посуху). Затем пипеткой или бактериальной петлей внести каплю воды постепенно готовя однородную взвесь и равномерно распределяя ее по поверхности стекла;

• мазок высушить на воздухе и зафиксировать - предметное стекло (мазком вверх) держа пинцетом троекратно проводят через пламя горелки (стекло не должно быть холодным или сильно горячим);

• один препарат окрасить водным раствором фуксина (1-2 мин), второй – метиленовым синим (3-5 мин).

• по окончании окрашивания препарат промывают струей воды до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной;

• высушить препарат на воздухе при комнатной температуре или осторожно промокая фильтровальной бумагой.

3.Провести микроскопию приготовленных микропрепаратов с конденсором светлого поля (конденсор поднят). Описать (определить форму) и зарисовать микропрепараты (формы бактерий, взаимное расположение по отношению друг к другу при делении).

4.Провести дезинфекцию рабочего места и утилизацию микропрепаратов. Провести дезинфекцию рук.

Теоретическая часть

Окрашенные тела микроорганизмов резко отличаются от общего фона препарата, что позволяет установить:

• ориентировочно состав микробного пейзажа изучаемого объекта;

• степень чистоты выделяемой культуры;

• некоторые морфологические особенности микроорганизмов (форму, размеры, наличие спор, жгутиков, капсул).

Приготовление окрашенного препарата состоит из нескольких последовательных операций:

• подготовки мазка;

• высушивания;

• фиксации;

• окраски.

Для этого используют совершенно чистые обезжиренные стекла. Наиболее простой способ обезжиривания состоит в натирании предметного стекла кусочком сухого мыла, а затем протирании чистой марлей. Капля воды, нанесенная на хорошо подготовленную поверхность, легко расплывается.

При взятии бактериальной культуры поступают следующим образом:

• нагревают до покраснения бактериологическую петлю в пламени горелки, петлю держат в рабочей руке (правой или левой) за петледержатель;

• берут пробирку с культурой в левую руку так, чтобы видеть поверхность питательной среды, вращательным движением вынимают пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и безымянным пальцем правой руки к ладони;

• одновременно обжигают край пробирки и пробку в пламени спиртовки, осторожно вводят петлю и берут материал;

• вынимают петлю, не касаясь стенок пробирки, снова одновременно обжигают край пробирки и пробку в пламени спиртовки, закрывают пробирку пробкой.

Если препарат готовят из бактериальной культуры, выращенной на плотной питательной среде, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильного физиологического раствора или стерильной водопроводной воды.

Взятый материал осторожно круговыми движениями распределяют по стеклу ровным тонким слоем, после чего петлю немедленно стерилизуют в пламени горелки. Следует помнить, что в этот период происходит работа с живыми микроорганизмами, поэтому резкие движения могут привести к разбрызгиванию материала и повлечь за собой инфицирование рук и окружающих предметов.

Для приготовления мазка из гноя или мокроты используют стерильные препаровальные иглы, с помощью которых кусочек субстрата помещают на середину предметного стекла, вторым стеклом покрывают сверху. Прижав одно стекло к другому, растирают материал, пока не получат тонкий мазок.

Препарат крови больного готовят по следующей методике: предметным стеклом, отступив 1-2 см от края, следует прикоснуться к капле крови, выступившей после укола. Быстро, чтобы кровь не свернулась, ребром шлифовального стекла распределить ее по всей поверхности.

Мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в токе теплого воздуха, держа предметное стекло высоко над пламенем. Нельзя допускать перегрева, так как при этом может нарушиться структура микроорганизмов.

При фиксации микроорганизмы погибают и плотно прикрепляются к поверхности стекла, не смываясь при дальнейшей обработке. Наиболее распространенным способом является фиксация в пламени. Предметное стекло (мазком вверх) троекратно проводят через пламя. При таком способе окраски фиксации сохраняются форма бактерий, споры, зерна волютина, однако способ нельзя применять для мазков крови, мазков – отпечатков из органов, а также при выявлении спор и жгутиков. Для этих целей проводят фиксацию в этиловом спирте (20 мин), в жидкости Никифорова, состоящей из смеси равных объемов этилового спирта и эфира (20 мин), в холодном ацетоне.

Существуют простые и сложные методы окраски. При применении простых методов используется только одна краска – водный фуксин (1-2 мин) или метиленовый синий (3-5 мин). По окончании окрашивания препарат промывают струей воды до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной, и сушат его на воздухе при комнатной температуре или осторожно промокая фильтровальной бумагой.

Сложные методы окраски предусматривают последовательное использование нескольких красителей различного химического состава, что позволяет выявить определенные структуры бактериальной клетки.