Исследование материала для осеменения животных

Разбавление и хранение спермы

ПМ.05 Выполнение работ по одной или нескольким профессиям рабочих, должностям служащих. Рабочая профессия «Оператор по искусственному осеменению животных и птицы»

Преподаватель: Непряхина В.О.

Разбавление спермы и его значение :

1. Продление жизни спермиев во внешней среде. Для этого необходимо:

• - уменьшить их активность, затормозить обменные процессы;
• - обеспечить дополнительными источниками энергии;
• - предотвратить накопление продуктов метаболизма;
• - защитить мембрану спермиев от разрушения;
• - предотвратить размножение микроорганизмов;
• - повысить устойчивость спермиев к перепадам температуры;
• Всё это достигается применением специальных разбавителей.

Разбавление спермы и его значение :

• 2. Увеличение объема эякулята:
• - по стандарту в 1 мл спермы – 0,7 млрд. спермиев
• - по ГОСТу объем эякулята должен быть не менее 3 мл, т.е. 2,1 млрд. спермиев всего.
• В дозе семени должно содержаться не менее 15 млн. спермиев с прямолинейным поступательным движением (это 40% в среднем, но может быть и больше). Активность спермиев должна быть не менее 8 баллов.
• Сперму быка можно разбавлять в 10-40 раз (от 1:9 до 1:39). При расчетах исходят из следующего норматива – в 1мл разбавленной спермы должно содержаться 25-50 млн. сперматозоидов (37,5 млн. в среднем):
• 2.1 млрд. : 50 млн. или 2,1 млрд. : 0,05 млрд. = 40 раз, во столько раз необходимо разбавить. 3 мл : 40 раз = 0,075 мл спермы идет на 1 дозу, объем увеличивают за счет добавления специальных разбавителей.
• Обычно сперму быка разбавляют в 10-15 раз (1:9 или 1:14), сперму барана и жеребца -1:1, 1:3 max, хряка 1:1-1:9 max.

• На 1 мл дистиллированной воды добавляется 30 г глюкозы, 4,5 г NaCl – это самая простая искусственная среда – создается оптимальный объем и оптимальное осмотическое давление. Разбавление производится не позднее 10 минут после получения спермы. С таким разбавлением сперму долго не хранят, и в течение ближайшего времени осеменяют, т.е такую среду используют для кратковременного хранения.
• Для кратковременного хранения семени также можно применять естественный раствор – молоко (есть молочный сахар для питания, белки, необходимое осмотическое давление). Свежее молоко доводят до кипения и охлаждают до 25ºС. Разбавленное молоком семя хранят при температуре +2-5ºС до 7 суток. Молоко обладает буферностью, увеличивает вязкость, имеет концентрацию водородных ионов и рН сходные с маточной слизью.

Требования к разбавителям для длительного хранения спермы

Должны быть изотоническими для спермы данного вида животных, обладать буферными свойствами, обеспечить сперму источниками энергии, поддерживать определённое соотношение электролитов и не электролитов, защищать от холодового шока, обладать антибактериальными свойствами.

Обычно разбавители для синтетических сред имеют следующие компоненты:

- Вода, д. быть дистиллированная, служит объемным материалом

- Сахара – (глюкоза, лактоза) энергетический материал для гликолиза, дыхания. Они способствуют сохранению спермиями отрицательного заряда.

Требования к разбавителям для длительного хранения спермы

- Цитрат натрия – (лимонно-кислый натрий) обеспечивает буферность, при рН 7,8-8,0, создает нормальное осмотическое давление, нейтрализует излишнюю кислотность, также сохраняет заряд спермиев.

- Желток куриного яйца – содержит питательные вещества и биологически активные вещества, витамины, аминокислоты, холестерин, до 7% лецитина. Предохраняет от температурного шока.

- Глицерин – сохраняет спермии при заморозке, цитоплазма замерзает стеклообразно, явление витрификации (не образуются кристаллы льда, которые могут разрывать оболочку спермиев)

- Антиоксиданты (токоферол, хелатон), загустители, свободные аминокислоты (аргинин, гликол), антибиотики (стрептоцид и др.). Хелатон – двунатриевая соль этил-диамин-тетрауксусной кислоты, сохраняет спермии при комнатной температуре.

Разбавление спермы

• В колбу отмеряют необходимое количество воды, закрываю горловину бумагой или пленкой и кипятят 1-2 мин. Охлаждают до 35ºС.
• Вносят в определенной последовательности химические компоненты. После полного растворения вносят желток.
• Яйца (снесенные не позднее 7 дня) моют, вытирают насухо, скорлупу стерилизуют ватным тампоном, смоченным в спирте. Разбивают по экватору, отделяют желток, который помещают на стерильный фильтр, прокалывают оболочку и фильтруют. Остатки отжимают через сложенные края фильтра. Добавляют санирующие препараты – спермосан.

Способы хранения и транспортировки спермы

1.  Краткосрочное хранение спермы при плюсовых температурах

2.  Длительное хранение спермы

1.  Краткосрочное хранение спермы при плюсовых температурах

Среды – молочно-желточные смеси и синтетические среды.

ГЦЖ – глюкозо-цитарные желточные – не более 3-х суток хранение для быков, не более 1 сут для баранов.

ЛХЦЖ – лактозо-хелато-цитарная желточная среда – не более 2 суток

Разбавляют небольшими порциями, сперму быка разбавляют в 2-6 раз, хряка – до 10 раз, жеребца – 4-5, барана 2-4 раза. Затем расфасовывают в полиэтиленовые ампулы, пробирки, флаконы. Обертывают ватой или синтепоном, помещают в термос или холодильник. Сейчас такое хранение применяют редко.

Для хранения семени хряков применяют среды с хелатоном: ГХУЖ – глюкозо-хелато-цитратно-желточная или ГХУС – сульфатная. Хранят не более 3 суток, +2-5 ºС. Не должно быть колебаний температуры. Семя хряка разливают в узкогорлые стеклянные колбы на 2/3 объема, закрывают бумагой и ватно-марлевой пробкой, хранят в холодильнике, 2 раза в сутки встряхивают. Транспортировка – сперма расфасовывается в емкости, входящие в состав осеменяющего инструмента.

*Хелатон – кислота этилен-диамин-тетрауксусная

2.  Длительное хранение спермы.

В жидком азоте -196 ºС. В гранулах (облицованных, необлицованных, или в соломинках – пайетах).

Криоконсервирование семени хряков

Особенности – большой объем эякулята. Семя хряков хуже переживает низкие температуры, чем семя быков. При центрифугировании эякулята отделяется плазма от спермиев. Разбавляют семя средами (эякулят хряков беден питательными веществами). В течении 2 часов проводят эквилибрацию семени, замораживают по 0,2 мл.

Криоконсервирование семени баранов

Разводят средами лактозо-желточно-гуммиарабик или трис-цитратная-хелатон в 3-4 раза, эквилибрация в течении 2-9 часов, замораживают по 0,2 мл на фторпластовой пластине.

Криоконсервирование семени жеребцов

Разбавляют лактозо-хелато-цитратной смесью с желтком. Разбавляют в 4-5 раз. Расфасовывают в полипропиленовые трубки (10 мл) или алюминиевые пакеты (по 20 мл). Герметизируют тару, затем эквилибрация и расфасовка.

Транспортировка

Если семя сохраняют при +t, то транспортируют в термосах. Если замороженное семя, то в сосудах Дьюара. Во избежание взрыва стаканы (канистры) зафиксированы, пробка не должна быть герметично закрыта. Нельзя наклоняться над горловиной сосуда. При закипании может произойти выброс азота. При открытой крышке может произойти испарение азота, заправка азота в сосуд производится в очках и перчатках. Концентрация азота в воздухе свыше 16% вызывает обморок, поэтому должны работать два человека в хорошо проветриваемом помещении.

Чтобы не травмировать спермии, необходимо работать охлажденными инструментами. В сосуде постепенно накапливается О 2 . При высокой температуре азот принимает газообразное состояние, что приводит к накоплению О 2 . При концентрации кислорода свыше 15% - взрывоопасная смесь.1 раз в месяц проводят дозаправку сосудов. Транспортировка семени сопровождается документами: ордера на отправку семени. В них указываются кличка, № производителя, дата взятия, замораживания семени, качественные показатели (активность в баллах) и качество семени перед отправкой.